PROTEÍNAS I
En esta práctica realizamos un reconocimiento de proteínas. Para esto, tomamos muestras de distintas sustancias como: caseína, ovoalbúmina, gelatina, aspartil, glicina y suero de leche; y las pusimos a reaccionar con dos reactivos llamados Biuret (sulfato cúprico e hidróxido de sodio) y Xantoproteico (ácido nítrico concentrado).
MATERIALES Y SUSTANCIAS:
-Vaso de bohemia
-varilla de vidrio
-mechero
-soporte
-tela metàlica
-gradilla
-tubos de ensayo
-termòmetro
-papel de filtro
-leche descremada
-àcido etanoico 2,0M
-hidróxido de sodio al 10%
-sulfato cúprico al 1%
-àcido nìtrico concentrado.
FUNDAMENTO TEÓRICO: La leche es:
a) Una emulsión de materia grasa (principalmente triaciglicéridos) en un medio acuoso.
b)Una suspensión de materia proteica (caseina, albúmina, globulina) en un medio acuoso.
c) Una solución acuosa de sales minerales y lactosa. Contiene además cantidades menores de lactina, vitaminas, enzimas, nucleótidos y grasas disueltos. La composición es variable según la especie considerada.
Dento de los componentes proteicos encontramos:
I) CASEINA: Complejo de proteinas fosforada. Constituye el 80% del total de los compuestos nitrogenados.
II) PROTEÍNAS DE LACTOSUERO: Albúminas y globulinas. Se insolubilizan por acción del calor antes de los 100ºC.
III) PROTEOSAS-PEPTONAS:Glicoproteinas poco abundantes en la leche.
CASEÍNA
Es una proteina de caracter acido debido a su elevada proporcion de aminoacidos acidos(PI:4,6). La caseina humana es mas rica en cistina y en glucidos que la vaca lo que la hace mas apropiada para el bebe. reacciona con las bases formando caseinatos utilizados en la industria para la fabricacion de colas y adhesivos. Tambien se utiliza en la industria textil. La caseina precipita por accion de los acidos. Esto puede ocurrur a travez de la formacion de acidos lactico por la accion bacteriana sobre la lactosa o mediante el agregado de un acido hasta alcanzar el pH correspondiente a su punto isoelectrico. La precipitacion puede producirse por la accion enzimatica dela quimiotripsina.
ENSAYO DE BIURET: Pone de manifiesto la presencia de enlaces peptídicos en un compuesto. El enlace peptídico es un enlace entre el grupo amino (NH2) y el grupo carboxilo (COOH) de otro aminoácido. Cuando la muestra es positiva (violeta), ocurre a la formación de un complejo de coordinación entre los iones Cu2+ y los pares de electrones libres de nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos.
ENSAYO XANTOPROTEICO: Detecta la presencia de proteínas solubles en una solución, emplenado ácido nítrico concentrado (HNO3). La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de grupos aromáticos, especialmente en presencia de tirosina, y la solución se torna de un color amarillo oscuro.
ENSAYO XANTOPROTEICO: Detecta la presencia de proteínas solubles en una solución, emplenado ácido nítrico concentrado (HNO3). La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con aminoácidos portadores de grupos aromáticos, especialmente en presencia de tirosina, y la solución se torna de un color amarillo oscuro.
Primera Parte: Extracción
1)-Coloque aproximadamente 25ml de leche descremada en un vaso de Bohemia.
2)-Caliente hasta aproximadamente 40ºC agitando con varilla de vidrio.
3)-Adicione ácido etanoico 2.0M (gota a gota) agitando de forma continua hasta coagulación total.
4)-Separe el coágulo de caseína del suero mediante filtración.
5)-Seque cuidadosamente la caseína con la ayuda de papel de filtro.
6)-Separe dos porciones del sólido obtenido de aproximadamente 1cm3 y colóquelas en dos tubos de ensayo.
Segunda Parte: Caracterización
Caseína
a)-Reacción de Biuret:Agregue sobre la caseína de uno de los tubos 20 gotas de NaOH al 10%.
Luego agregue 2 gotas de solución de CuSO4 al 1%.
b)- Reacción xantoproteica: Agregue sobre la caseína del segundo tubo 10 gotas de HNO3 concentrado. Espere un par de minutos y anote sus observaciones.
Glicina
Biuret
Xantoproteica
Aspartil
Biuret
Gelatina
Biuret
Xantoproteica
Ovoalbúmina
Biuret
Xantoproteica
Suero de Leche
El cuero es el líquido remanente de la coagulación de la leche. Se obtiene tras la separación de proteínas(caseína).Constituye aproximadamente el 90% del volumen de la leche y contiene la mayor pare de sus componentes solubles en agua: carbohidratos, minerales, vitaminas hidrosolubles y poteínas solubles.
Proteínas del Suero
CONCLUSIONES
En la caseína el ensayo de biuret nos da una muestra de color violeta, por lo tanto exiten enlaces peptídicos y por lo tanto proteína. Para el ensayo xantoproteico nos da una muestra de tono amarillo por lo tanto contiene aminoácidos con restos aromáticos.
En la ovoalúmina el ensayo de biuret nos da positivo (violeta). Para el ensayo xantoproteico se observó una muestra espumosa y de color amarillo esto significa que tiene restos aromáticos.
En la gelatina para el ensayo de biuret nos da positivo, esto significa que presenta proteínas de dos o más enlaces peptídicos. Para el ensayo de xantoproteico nos da negativo, no hay restos aromáticos.
En la glicina en el ensayo de biuret nos dio una solución de color azul, por lo tanto no hay presencia de proteína. Para el ensayo xantoproteico nos dio también negativo(transparente) no hay restos aromáticos.
En el aspartil en el ensayo de biuret nos da una solucion de color celeste por lo tanto no hay evidencia de enlaces peptídicos. El ensayo xantoproteico dio negativo, tampoco hay restos aromáticos.
Para el suero de leche en biuret nos da positivo, esto significa que existen enlaces peptidicos y xantoproteico nos da negativo, por lo tanto, no hay restos aromáticos.
RESULTADOS DE LA OBSERVACIÓN:
PROTEÍNAS II (Diálisis)
En este práctico se pretende demostrar que a través de diálisis el NaCl es capas de atravesar libremente la membrana semipermeable, mientras que las proteínas no la atraviesan
DIÁLISIS:Es el proceso que separa las moléculas en una solución por la diferencia de sus indices de difusión o presión a través de una membrana semi-permeable
MATERIALES Y SUSTANCIAS:
-Dializador
-Vaso de Bohemia
-Tubo de ensayo
-Pipeta
-Agua destilada 50 ml
-gelatina, una cucharadita
-CuSo4 al 1%
-NaOH al 10%
-NaCL
-AgNO3(nitrato de plata)
REACCIÓN DE NITRATO DE PLATA
El AgNO3 detecta la presencia de aniones cloruro.
Nitrato de Plata (AgNo3):
AgNo3 → Ag+ (ac) + No3- (ac)
antes de dializar:
ambas soluciones nos dieron positivas debido a que contiene proteínas
después de la diálisis:
Cloruro de sodio:
NaCl → Na+ + Cl-(ac)
Cuando entran en contacto el Nitrato de Plata con el Cloruro de Sodio:
Ag+(ac) + Cl¯(ac) → AgCl(s)
La reacción se considera positiva con AgNO3 cuando la muestra queda de color blanco.
PROCEDIMIENTO:
-En el dializador prefabricado con un fondo de papel celofán que simula la membrana semipermeable,se coloco una solución acuosa a dializar.
-El dializador se introdujo dentro de un vaso de bohemia con agua destilada.
-Tomamos muestras y las testeamos en busca de sales y proteínas con los ensayo de biuret y AgNo3
- se dejó reposar unos 10 minutos (aprox.)
- Tomamos nuevamente pequeñas muestras del interior y exterior del dializador y realizamos los ensayos de biuret y AgNo3
antes de dializar:
después de la diálisis:
1)-colocamos 50 ml de agua, 1/4 de NaCl y gelatina(1 cucharada), calentamos hasta ebullición, y luego enfriamos a baño maria
2)- vertimos 100ml de agua destilada en un vaso de bohemia
3)-sumergimos el dializador dentro del vaso de bohemia
4)-vertimos la solución en el dializador
5)-con una pipeta sacamos 2 ml de solución del dializador
6)-le agregamos 20 gotitas de NaOH y 2 gotitas de CuSo4
esta reacción dio positivo(violeta)
7)- extraemos 2 ml de solucion del dializador y le agregamos 2 gotitas de AgNo3.
esta reacción dio positivo(blanco)
8)- extraemos del vaso de bohemia con una pipeta 2 ml de agua destilada, le agregamos NaOH y CuSO4
Esta reacción dio negativo(celeste)
9)- extraemos del vaso de bohemia con una pipeta 2 ml de agua destilada, le agregamos 2 gotitas de AgNo3.
esta reacción dio positivo(blanco).
CONCLUSIONES
EXTERIOR
El ensayo con AgNo3 de la muestra obtenida del agua del exterior del dializador dio positivo esto demuestra la presencia de cloruro de sodio, siendo que antes no la había (dio negativo).
El ensayo de biuret dio negativo lo cual demuestra que no hay proteínas en el agua de exterior del dializador, con estos resultados llegamos al objetivo de la practica demostramos que a través de diálisis el NaCl es capas de atravesar libremente la membrana semipermeable, mientras que las proteínas no la atraviesan.
INTERIOR
El ensayo de biuret dio positivo en el interior porque este contiene gelatina y la gelatina es una proteínaEl ensayo con Agno3 dio positivo en el interior porque le agregamos Nacl al interior de la botella y esto se disocio obteniendo la presencia de aniones cloruro que reaccionando con cationes plata forman Agcl.
JABONES Y DETERGENTES
OBJETIVO:
-Obtener un jabón y un detergente
- Realizar un estudio comparativo de algunas de las propiedades de jabones y detergentes.
MATERIALES:
-Dos vasos de bohemia de 50 ml
-Probeta de 10 ml
-Soporte para vaso de bohemia
-Gradilla con tubos de ensayo
-Pinzas para vaso de bohemia y tubos
-Varilla de vidrio
-Espátula
-Cuentagotas
-Mechero
-Embudo
-Papel de filtro
-Papel PH
SUSTANCIAS:
-Aceite de coco
-Solución hidroalcohólica de NaOH
-Azufre en polvo
-Bióxido de magnaneso
-Agua
-Ácido bencenosulfónico
SOLUCIONES:
-NaOH 6M
-Cloruro de calcio 1%
-Urea 40%
-Sulfato de amonio 40%
-Hipoclorito de sodio
JABONES:
Son sales sódicas o potásicas que se fabrican a partir de grasas o aceites, y una base, que puede ser fuerte (NaOH), o puede ser una base débil (KOH).
El proceso de fabricación de jabones a partir de aceites es la saponificación y los jabones obtenidos son surfactantes aniónicos (con carga negativa).
DETERGENTES:
Son productos limpiadores mas eficaces que los jabones porque contienen mezclas de surfactantes (agente activo de superficie) que les permiten trabajar en distintas condiciones; por eso son menos sensibles a la dureza del agua que los jabones.
ademas de los surfanctante posee otras sustancias como:
-Agentes coadyudantes
-Agentes auxiliares
Los detergentes por ser sales de ácidos y de bases fuertes producen soluciones neutras, mientras que los jabones que son sales de ácidos débiles con bases fuertes producen soluciones alcalinas.
PROCEDIMIENTO:
PARTE I: OBTENCIÓN DE JABÓN
1)-Mida 19ml de solucíón de hidroalcohólica de NaOH en un vaso de bohemia.
2)-Caliente suavemente hasta entibiar.
3)-Mida 25ml de aceite de coco y agregue lentamente en el vaso de bohemia con la solución hidroalcohólica con agitación continua.
4)-Siga calentando con llama baja y agitando continuamente, hasta la formación de una pasta.
5)-Retire el mechero y saque el jabón con una espátula.
Resultado:
OBTENCIÓN DE UN DETERGENTE:
1)Colocar 5ml de ácido sulfónicos en un vaso de precipitados de plástico
2) Neutralizar agregando gota a gota el hidróxido de sodio 6M con continua agitación.
3) Medir el PH y de ser necesario agregar más hidróxido de sodio hasta lograr PH entre 6 y 8
4) Adicionar dos gotas de hipoclorito de sodio como blanqueador
5) Incorporar 5ml (medidos con probeta) de urea como solubilizante.
6) Agregar 15ml de agua.
7)Agregar 2ml de sulfato amonio como espesante, sin dejar de mezclar. Dejar reposar, y ya está listo el detergente.
PARTE II: ESTUDIO COMPARATIVO DE PROPIEDADES
a)-Coloque un trozo pequeño de jabón obtenido en un vaso de bohemia. Agregue agua hasta un volumen de 50ml. Agite hasta disolución.
b)-En otro vaso de bohemia coloque agua hasta un volumen de 40ml y agregue 10ml aprx de detergente.
ACCIÓN EMULSIONANTE:
a)-Coloque en un tubo de ensayo 2ml de agua y 5 gotas de aceite. Agite y observe.
b)-Repita el procedimiento para 2ml de solución jabonosa y 2ml de solución de detergente en tubos separados. Agite y observe.
EFECTO DEL ION CALCIO:
EFECTO DEL ION CALCIO:
a)-Coloque 2ml de solución jabonosa en un tubo y en otro 2ml de solución detergente. Agite para aumentar la espuma.
b)-A cada tubo agréguele una gota de solución de cloruro de calcio y observe.
EFECTO SOBRE LA TENSIÓN SUPERFICIAL:
a)-Coloque aprox 40ml de agua en un vaso de bohemia y espolvoree azufre sobre la superficie.
b)-Realiza el mismo procedimiento pero utilizando solución jabonosa y solución de detergente.
PODER DETERGENTE:
a)-Colocar en un tubo de ensayo agua y una punta de espátula de bióxido de manganeso, agitar. b)-Repetir el procedimiento para las soluciones de jabón y detergente.
c)-Filtrar el contenido de los tres tubos, observar.
Agua con detergente y MnO2
Agua con jabón y MnO2
Agua con MnO2
Cuestionario:
1) Averigua la composición porcentual de ácidos grasos presentes en el aceite de coco
- Ácido caproico C-6 = 0,0 – 0,8
- Ácido caprílico C-8 = 5,0 – 9,0
- Ácido cáprico C-10 = 6,0 – 10,0
- Ácido láurico C-12 = 44,0 – 52,0
- Ácido mirístico C-14 = 13,0 – 19,0
- Ácido palmítico C-16 = 8,0 – 11,0
- Ácido palmitoléico C-16:1 = 0,0 – 1,0
- Ácido esteárico C-18 = 1,0 – 3,0
- Ácido oleico C-18:1 = 5,0 – 8,0
- Ácido linoleico C-18:2 = Trazas – 2,5
- Ácido araquídico C-20 = 0,0 – 0,4
2)Formule las ecuaciones químicas correspondientes a la formación del detergente
Jabón:
C12 H24O2 + NaOH → NaCO2 + C3O3H8 + H2O
C12 H24O2 + NaOH → NaCO2 + C3O3H8 + H2O
Detergente:
C12 H24O2 + SO3H → C16O4SH34 + H2O
C12 H24O2 + SO3H → C16O4SH34 + H2O
3) Explique la acción detersiva (emulsionante, y tensoactiva) del jabón y del detergente.
- Los jabones limpian sobre las grasas, cuando hay agua debido a la estructura de sus moléculas. Éstas tienen una parte liposoluble (soluble en grasas) y otra hidrosoluble (soluble en agua).
La efectividad de los agentes tensoactivos de los detergentes como emulsionantes está basada en su capacidad para disminuir la tensión superficial, así como en sus propiedades solubilizantes y dispersantes. La inmediata emulsificación que se obtiene con los agentes tensoactivos es el resultado de su capacidad para reducir la tensión superficial.
4) ¿Qué entiende por agua dura? ¿Cuál de las soluciones preparadas es la más adecuada para cumplir con la acción detergente en este medio?
Agua dura: Agua que contiene sales de metales pesados, especialmente hierro y calcio.
Jabón:Son inefectivos para la limpieza en agua dura porque precipitan en forma de sales insolubles (costra de las bañeras).
Detergente:Son más efectivas.
-La solución preparada mas adecuada para cumplir con la acción detergente, seria la de poder detergente.
Conclusión
Las conclusiones a las que hemos llegado tras la realización de la práctica son que los jabones se forman mediante una reacción denominada “saponificación”. Esta reacción consiste en una hidrólisis en medio básico de las grasas, que de este modo, se descomponen en sales de potasio o sodio (jabones) y glicerina.
Las grasas son insolubles en agua, pero se dispersan formando micelas cuando se encuentran en un medio básico. Los jabones son sales de potasio o sodio, que emulsionan la grasa rodeando una microgota: las cadenas hidrocarbonadas (hidrófobas) se orientan hacia la grasa, mientras que los grupos carboxilo (hidrófilos), se disponen hacia el agua.
GLÚCIDOS I
Los glúcidos son una familia de compuestos con características químicas comunes. Están constituidos por carbono, hidrógeno y oxigeno. Todos ellos son cadenas carbonadas lineales, sin dobles enlaces. Todos sus carbonos, excepto uno, están unidos a un grupo alcohol, mientras que el otro lleva un grupo carbonilo. El grupo carbonilo puede encontrarse en un extremo de la molécula (aldehído) o en un carbono intermedio (cetona). Los glúcidos se dividen en monosacáridos,
disacáridos, oligosacáridos y polisacáridos.
REACTIVO DE FEHLING
Esta prueba se utiliza para el reconocimiento de azúcares reductores. El poder reductor que pueden presentar los azúcares proviene de su grupo carbonilo, que puede ser oxidado a grupo carboxilo con agentes oxidantes suaves. Si el grupo carbonilo se encuentra combinado no puede presentar este poder reductor.Los azúcares reductores, en medio alcalino, son capaces de reducir el ión Cu2+ de color azul a Cu+ de color rojo. Para ello el grupo carbonilo del azúcar se oxida a grupo carboxilo.
Si la muestra da un color rojo-marrón, es positiva osea que es reductor porque tiene el carbono anomérico libre.Si la muestra da un color azul, es negativo osea que no es reductor.
REACTIVO DE TOLLLENS
Es un complejo acuoso diamina-plata, de fórmula Ag(NH3)2OH, presentado bajo la forma de nitrato. Este es un agente oxidante el cual genera plata al reaccionar y se utiliza generalmente para comprobar la presencia de aldehídos, que son oxidados por ácidos carboxílicos.
Si la muestra da un color plata es positivo por tanto es reductor.
Si la muestra es incolora es negativo, no es reductor.
PROCEDIMIENTO FEHLING:
-10 gotas de solución fehling A y 10 gotas de solución fehling B
-Agitar
-Agregar 20 gotas de la muestra
-Calentar hasta ebullición.
PROCEDIMIENTO TOLLENS:
-20 gotas de AgNO3 y 1 gota de NaOH.
-NH3 gota a gota hasta disolver.
-20 gotas de la muestra.
-Calentar sin agitar.
Fehling:Glucosa
HIDRÓLISIS DE ALMIDÓN
¿Qué es el almidón?
El almidón es un polisacárido formado, como la celulosa, por la condensación de miles de moléculas de glucosa (en concreto los monómeros son unidades de α-D-glucopiranosa) mediante enlace glucosídico.
Poder reductor del almidón:
El extremo de la cadena polisacarídica que contiene el Carbono anomérico libre (que no forma parte de un enlace glucisídico) se conoce como extremo reductor. De todas formas, los polisacáridos no son reductores si bien presentan ese extremo libre con capacidad reductora. La razón es que un grupo reductor cada cientos de moléculas no es suficiente para ser visualizado a través de las técnicas como Fehling usada para determinar un poder reductor.
Lugol:
Es una solución de yodo metálico y yoduro de potasio que sirve para identificar polisacáridos. Cuando se agrega una sustancia que lleva almidón a una solución de yodo (lugol), esta se tiñe de un color violeta intenso. Esto es debido a que los átomos de yodo se introducen en las espirales (amilosa), dándoles esa coloración. El color desaparece al calentar la disolución volviéndose transparente porque los átomos de yodo se salen de la espiral. Al enfriar la disolución retorna al color violeta.
Contiene dos tipos de polisacáridos distintos: la amilosa y la amilopectina.
La amilosa presenta una cadena lineal, no ramificada, formada por unidades de glucosa con enlaces denominados
α-(1 → 4), pero también presenta gran cantidad de ramificaciones (una cada doce monómeros) con enlace de tipo α-(1 → 6).
¿Cómo actúa la amilasa sobre el almidón?
La enzima amilasa degrada el almidón.
La enzima amilasa degrada el almidón.
¿Qué reacción ocurre cuando la amilasa actúa sobre el almidón?
La amilasa rompe los enlaces que constituyen al almidón y se convierte en glucosa y maltosa.
Reacción de la amilosa y la amilopectina:
Al reaccionar el almidón con el lugol forma un color violeta debido a que el almidón está constituido por amilosa que al reaccionar con el yodo da un color azul y amilopectina da un color rojo es por eso que al combinarse dan un color violeta, y es una reacción de coloración.
Al reaccionar el almidón con el lugol forma un color violeta debido a que el almidón está constituido por amilosa que al reaccionar con el yodo da un color azul y amilopectina da un color rojo es por eso que al combinarse dan un color violeta, y es una reacción de coloración.
1) Comenzamos preparando el almidón.
2) Hacemos el ensayo de Fehling con el almidón y calentamos hasta ebullición.
3) Agregamos a una muestra de almidón una gota de lugol.
4) Hacemos la hidrólisis el almidón.
5) Tomamos una muestra de la hidrólisis del almidón y le aplicamos la solución de fehling.
6) Tomamos otra muestra de la hidrólisis del almidón y le aplicamos una gota de lugol.
conclusión:
Puede observarse la diferencia en el color del yodo frente a distintas cadenas de glúcido: azul para el almidón, rojo para las dextrinas y amarillo para la maltosa
